Méthode EIA pour la détermination qualitative de la liaison du Facteur de von Wilebrand (vWF) au collagen (CBA Collagen Binding Activity) dans le plasma humain. Tous les réactifs sont inclus dans le kit.
Le vWF est une protéine multimérique produite par les cellules endothéliales et les mégakaryocytes. Il circule dans le sang sous forme de multimères allant de 500 à plus 20 000 kDa. Il favorive l'addhésion des plaquettes au sous-endothélium des vaisseaux sanguins endommagés. En se fixant au FVIII, il prolonge sa demi-vie. Les multimères ultra-larges de vWF sont clivés par l'ADAMTS-13. La fonction biologique du vWF dépend largement de la taille de ses multimères. Les multimères larges sont plus susceptibles de se lier aux plaquettes et au collagène, et de promouvoir l’adhésion des plaquettes dans la circulation sanguine. La concentration plasmatique du vWF s'élève à 10µg/ml.
Principe
Le plasma dilué à tester ou l'échantillon est introduit dans les puits de la microplaque sensibilisés avec du collagène fibrillaire. Lorsqu'il est présent, le vWF se fixe à la phase solide via sa capacité de liaison au collagène. Après une étape de lavage, l'immunoconjugué, qui est un anticorps polyclonal couplé à la peroxydase (HRP), est introduit, et se lie auxépitopes libres du vWF immobilisé. Après une étape de lavage, le substrat TMB, est introduit dans les puits de la plaque et une coloration se développe. Cette coloration est directement proportionnelle à la concentration de vWF:CBA humain dans le plasma ou dans l'échantillon à doser.
Données clés
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